Блог Лабораторные исследования и технологические процессы

07/15/2021
by Администратор Главный

Блог о различных лабораторных исследованиях и технологических процессах. Новости из мира аналитических лабораторий и высокотехнологичной обработки материалов.

Применение проточной цитометрии

09/18/2021
by Администратор Главный
Самое простое приложение проточной цитометрии – подсчет клеток и оценка их жизнеспособности. Для этого используются классические красители на жизнеспособность, например, наборы LIVE/DEAD kit или Muse® Count and Viability Kit. Набор состоит из одного или нескольких красителей, которые позволяют отличить мертвые клетки или клетки с нарушенной целостностью клеточной мембраны от живых клеток.
Проточную цитометрию можно использовать для анализа клеточного цикла. Различные стадии клеточного цикла отличаются по содержанию ДНК в клетке. Наборы для анализа клеточного цикла содержат ДНК-связывающие красители, интенсивность флуоресценции которых пропорциональна количеству ДНК. С помощью гистограммы интенсивности флуоресценции можно выделить клетки в G0/G1, S и G2/M фазах клеточного цикла.
Анализ апоптоза основан на связывании Аннексина V с фосфотидилсерином на поверхности апоптотирующих клеток. На ранних стадиях апоптоза молекулы фосфотидилсерина перемещаются на внешнюю сторону клеточной мембраны и способны связываться с Аннексином V. На поздних стадиях апоптоза клетки теряют целостность клеточной мембраны и поглощают краситель, который иначе не смог бы проникнуть через клеточную мембрану.
analiz-apoptoza.jpg
Для анализа различных стадий апоптоза проводят определение активированных каспаз в сочетании с красителем, окрашивающим мертвые клетки.

Проточная цитометрия в иммунологии активно используется для иммунофенотипирования клеток крови, позволяет идентифицировать внутриклеточные белки, оценить степень цитотоксичности, и многое другое.


Субпопуляции Т-клеток периферической крови и поверхностные антигены, применяемые для их выявления
* только для научных исследований, не для клинической диагностики
Проточная цитометрия в клинической лабораторной диагностике

Достаточно быстро проточная цитометрия стала рутинным методом в диагностических лабораториях клиник.
На сегодняшний день проточные цитометры, зарегистрированные Росздравнадзором, в лабораторной диагностике активно используют для оценки иммунного статуса пациента (для этого используют такие поверхностные маркеры, как CD3, CD4, CD8, CD 19, CD 20, CD22 и т.д.), оценку иммунологического фенотипа нормальных и опухолевых клеток для своевременной постановки диагноза, а также отслеживание острых лейкозов в ходе лечения. Большой вклад проточная цитометрия внесла в диагностику гемобластозов.


Реагенты для проточной цитометрии

Для работы на проточных цитометрах используются как клеточные красители, так и моноклональные антитела для проточной цитометрии для научных, так и клинических приложений. Антитела отличаются как по мишени и видоспецифичности, так и по конъюгированным с антителами флуоресцентным меткам.
В зависимости от конфигурации проточного цитофлюориметра (длин волн и количества лазеров и флуоресцентных каналов) можно создавать многоцветные панели из антител.

Основные правила составления многоцветных панелей.

Таблица 1. Флуорохромы, наиболее часто используемые для прямой конъюгации с моноклональными антителами

ФлуорохромыДлина волны возбуждения, нмЭмиссия, нм
Флуоресцеинизотиоцианат (FITC)488525
Алекса Флуор 488 (Alexa Fluor 488)488525
Фикоэритрин (PE, R-PE, RD1)488575
ECD (PE-Texas Red)*488610
PC5 (PE/CY5)*488675
PC5.5 (PE/CY5.5)*488700
PE Alexa Fluor 700*488725
PC7 (PE/CY7)488790
Алофикоцианин (АРС)633/635680
Alexa Fluor 647633/635680
Alexa Fluor 700633/635725
APC Alexa Fluor 700*633/635725
APC7 (APC/CY7)*633/635790

Примечания: CY – цианин; * – тандемные флуоресцентные красители
Почему проточной цитометрии – быть

Сравнивая с молекулярными методами диагностики, главные преимущества проточной цитометрии — это возможность быстрой оценки большого количества параметров при относительной экономичности исследования. С другой стороны, многообразие реагентов и технологических решений (от самых простых клеточных анализаторов до проточных цитометров и цитометров с визуализацией) позволили значительно расширить как прикладные, так и диагностические возможности проточной цитометрии, делая ее одним из мощнейших методов клеточного анализа.

Исследование высокочистой меди на анализ микропримесей

09/13/2021
by Администратор Главный

Анализ высокочистой меди атомно-эмиссионным методом на спектрометре с индуктивно связанной плазмой. Неспектральные помехи учитываются методом стандартных добавок. Число параллельных анализов - 3, масса каждой аналитической навески 0.6-0.7 гр.



Comments

No posts found

Write a review